Problemes de segellat i contaminació a les plaques de cultiu de cèl·lules multiwell

Càrrega i manipulació de plaques de cultiu cel·lulars multiples:

La placa de cultiu cel·lular també segueix el principi de l’asepsi estricta a l’hora de realitzar operacions cel·lulars. Totes les operacions han de ser estandarditzades i científiques i no causaran un impacte addicional en el creixement cel·lular. El problema més comú és com assegurar la uniformitat de les cèl·lules després d’afegir la mostra i minimitzar l’impacte de canviar el medi sobre l’estat de creixement de les cèl·lules.

Pregunta:
Les tapes de plaques de cultiu de 96 i 24 pous o plats Petri són molt fluixos, cosa que és convenient per a la ventilació, però també hi haurà bacteris, motlles i altres contaminants?

Resposta:
La tapa és molt fluixa, que pertany a la cultura semi-oberta, i l’objectiu d’això és ventilar (de fet, és fer que el CO2 fora del plat de cultiu interconti plenament amb el plat de cultiu i mantenir el valor de pH de la cultura mitjà).
Tot té avantatges i desavantatges, que per descomptat augmenta la possibilitat de contaminació. A més, això fa que el líquid del plat s’evapori, cosa que és notable per a la dosificació precisa de les drogues. Per tant, són necessàries les dues mesures següents: a. L’aire de la incubadora ha d’estar net (llum ultraviolada regular, fregament d’alcohol i la incubadora s’ha d’obrir i tancar el mínim possible) b. La humitat de la incubadora sempre s’ha de mantenir al 100% (l’aigüera amb aigua destil·lada estèril col·locada a la incubadora).
Igual que un plat Petri, també és un recipient amb una tapa cap per avall i no es contaminarà. Principalment a causa de la pressió negativa del flux d’aire generat per la vora “L” de la coberta, hi ha microorganismes units a la pols i la pols portada pel flux d’aire no pot passar per la vora de la coberta que genera pressió negativa. L’efecte de ventilació només és a través de la difusió de l’aire i no es generarà cap flux d’aire, de manera que només respirarà i no penetrarà els bacteris.

Pregunta:
Utilitzant una placa de 24 pous, hi ha operacions en alguns dels pous (al banc ultra-net), i hi ha cèl·lules que es cultiven en altres pous. Em preocupa que això causi contaminació. No sé a què prestar atenció?

Resposta:
Si l'operació està estandarditzada al banc ultra-net, hauria d'estar bé. Crec que podeu aprofitar al màxim la portada de la placa de cultiu, intentar exposar només els forats a funcionar i cobrir els altres forats amb cobertes.
Considereu de forma exhaustiva abans de l’ús i feu l’ús complet de tots els forats; Si només heu d’utilitzar uns quants forats, només podeu utilitzar un costat i cobrir la resta amb una coberta. Estic acostumat a utilitzar primer el forat dret (és convenient afegir mostres a la mà dreta).

Quan opereu, utilitzeu unes tobogans de vidre per aixecar un costat del tauler, no obriu la coberta completament, generalment cap problema.
Distribució i solucions de cèl·lules desiguals

Pregunta:
Les cèl·lules s’inoculen a la placa de cultiu i les cèl·lules sempre es reuneixen a la part perifèrica, com afrontar -la?

Resposta:
Puc preguntar -me com es barregen les vostres cèl·lules? Es tracta de canalitzar o sacsejar la placa de cultiu? Si és aquest últim, i si es sacseja en un cercle, és molt probable que les cèl·lules siguin llançades a la part perifèrica a causa de la força centrífuga, donant lloc a menys cèl·lules del centre. Més de quatre setmanes!
Heus aquí una bona manera: abans de conrear la placa de llavors, poseu la placa de cultiu a la incubadora durant unes hores de saturació i després traieu -la. La força ha de ser lleugera a l’hora de plantar les cèl·lules. Afegir lentament permet que la suspensió de la cèl·lula flueixi als pous de la placa i les cèl·lules cultivades creixen bàsicament uniformement. No oblideu mai sacsejar -vos amb un agitador, o les vostres cèl·lules s’enfonsaran com heu dit.
Com més petit sigui el diàmetre del forat de la placa de cultiu, més evident és aquest fenomen. Aquest fenomen és inevitable per a plaques de 24 i 96 pous, perquè el líquid s’adhereix a la paret de manera que la solució de cultiu del pou no forma un nivell de líquid, però la perifèria és alta, igual que un mirall còncau. Tanmateix, quan s’utilitzen aquests dos tipus de plaques d’orifici, no és possible afegir una quantitat suficient de solució de cultiu a causa de la necessitat d’intervenció addicional, de manera que les cèl·lules apareixeran “recollida de vora” juntament amb la solució de cultiu. Depèn dels indicadors que necessiteu observar. Si és MTT, la immunohistoquímica afectarà els resultats a causa de la capa cel·lular.
En digerir cèl·lules, presteu atenció a la canalització de manera uniforme per evitar els grups cel·lulars i la quantitat de solució de cultiu al pou hauria de ser suficient. Generalment, afegiu prou solució de cultiu quan s’inoculi i canvieu la solució un cop afegiu la intervenció. La quantitat de solució de cultiu afegida a la solució d’intervenció és igual a la quantitat de solució de cultiu en el moment de la inoculació, en aquest cas, es millorarà el fenomen del “conjunt de vora”, de manera que també ho podreu provar.

Pregunta:
El que vaig fer va ser l’experiment de formació de plaques. El millor és difondre les cèl·lules en una capa uniforme. La majoria dels forats estan bé quan s’inocula el virus i alguns no són uniformes. Hi ha grans diferències en el grup de cèl·lules. M'agradaria preguntar -vos quin mètode utilitzeu quan afegiu cel·les?

Resposta:
És fonamental canalitzar les cèl·lules en una suspensió de cèl·lules després de la digestió. Assegureu -vos que el nombre de cèl·lules de cada pou sigui consistent en dividir la placa.
Per descomptat, també hi ha factors de processament. El paral·lelisme entre els pous també és molt important. Per exemple, quan afegiu medicaments, barregeu el medicament després de la dilució per assegurar -vos que la concentració de cada pou sigui consistent.
A més, quan s’afegeixen cèl·lules i fàrmacs, s’hauria d’afegir el grup de prova i el grup de control per evitar la diferència en la densitat cel·lular i la concentració de fàrmacs causada per la seqüència d’afegir mostres.

Pregunta:
El bufat ja és uniforme, però el planxa, 6 forats i 24 forats sempre són una mica desiguals i una mica concentrats al centre. A més, és obvi que el recompte es fa i al cap d’un dia o dos, la densitat de cada forat és diferent, cosa que afectarà la detecció. Hi ha una bona manera?

Resposta:
Si utilitzeu una pipeta de pasteur, no xucleu massa cada cop, perquè les cèl·lules de la pipeta s’enfonsaran automàticament, sovint el nombre de cèl·lules dels primers forats és gran i la suspensió de la cèl·lula sovint és uniforme i el líquid ho farà Seguiu la ruta en forma de S.
Si utilitzeu una pipeta, les puntes s’han de processar i eliminar per evitar danyar les cèl·lules, de manera que cada vegada que es pren el líquid correspon a un pou. És més exacte afegir un forat un a un amb punta. Però també presteu atenció a la barreja de la suspensió.

Per configurar un grup paral·lel, n ha de ser prou gran (podeu calcular -lo).

No tremola després de la placa, ja que la sacsejada farà que les cèl·lules s’agreguin cap al centre. El millor és planificar una vegada.

La placa de cultiu cel·lular porós Yongyue Medical sempre ha considerat el control de la qualitat com la vida de l’empresa i ha perseguit la millora contínua de la competitivitat empresarial. L’empresa sempre s’adhereix a l’esperit empresarial d’obeir les lleis i les regulacions, sent estricta amb l’autodisciplina, sent indulgent i atrevit a assumir la responsabilitat com a estàndard en funcionament, mantenint i ampliant el mercat amb una qualitat excel·lent i un servei excel·lent i complint el necessitats dels clients en la major mesura. . Win-Win amb els clients és el nostre objectiu de desenvolupament. Yongyue Medical! El vostre soci de confiança. Estem disposats a cooperar sincerament amb vosaltres per crear un futur millor.