Consells bàsics per a la criopreservació dels cultius cel·lulars

Consells bàsics per a la criopreservació dels cultius cel·lulars

Les cèl·lules continuen el seu metabolisme durant les activitats normals de creixement, cosa que requereix la participació de diverses proteases. Quan la temperatura baixa per sota de -70 ° C, les proteases deixen de funcionar. Per tant, en un entorn amb temperatures extremadament baixes, les cèl·lules poden aturar les seves activitats metabòliques i entrar en un estat latent que permet l’emmagatzematge a llarg termini.

1. Materials experimentals

Material base:

Cultura bàsica Mitjana

Sèrum (FBS convencional/NBS)

Ultrapure Workbench

Sulfoxid de dimetil estèril (DMSO)

Solució de sal de tampó de fosfat PBS estèril

Pistola de canalització

Pistola de canalització elèctrica

Preparació dels experiments

a) Preparació de la solució de congelació:

Cèl·lules generals: 55% medi basal + 40% sèrum boví (FBS/NBS) + 5% DMSO

Cèl·lules vitals: 90% sèrum boví (FBS/NBS) + 10% DMSO

Aliquot La solució preparada de criopreservació en un tub de centrífuga de 15 ml [niu] i emmagatzeneu -ho a 4 ° C per a un ús posterior.

(b) Preparació de cèl·lules per congelar:

Abans de congelar les cèl·lules, seleccioneu les cèl·lules amb un bon estat de creixement i en la fase de creixement logarítmic i substituïu-les per un medi fresc 12-24 hores abans de la congelació per mantenir la condició de la cel·la.

2. Procediment experimental

1. Observeu la densitat de les cèl·lules que es congelen, que és al voltant del 80%~ 90%. Utilitzeu una pistola de pipeta per aspirar el medi antic, afegiu-hi PBS estèril per rentar les cèl·lules 1-2 vegades i elimineu el medi restant a l’entorn de cultiu.

2. Afegiu una quantitat adequada de trypsina o suc digestiu per permetre que la tripsina entri a les cèl·lules i poseu -les a la incubadora per a la digestió. Observeu la condició de les cèl·lules al microscopi: el citoplasma es retracta i les cèl·lules ja no estan connectades a les làmines. En aquest moment, afegiu la solució STOP per aturar el procés de digestió.

3. Bombolla suaument les cèl·lules amb una punta per formar una suspensió de la cèl·lula i centrifuga la suspensió de la cèl·lula a 1000 rpm durant 3-5 minuts.

Descarregueu el sobrenedant, afegiu una quantitat adequada de solució de congelació i una pipeta suaument per fer que les cèl·lules comptin uniformement. Ajusteu la densitat cel·lular amb el medi de criopreservació per fer la densitat final 5 × 106/ml ~ 1 × 107/ml.

4. Utilitzeu una pistola de pipeta per separar els tubs criogènics segons la capacitat esperada i utilitzeu una màquina de captació automàtica per tapar i segellar.

5. El programa estàndard de criopreservació és una velocitat de refrigeració de -1 ° C a -2 ° C/min, i les cèl·lules que es poden congelar es poden congelar gradualment segons els passos següents: temperatura ambient → 4 ° C (20min) → - - - 20 ° C (30min) → -80 ° C ° C (durant la nit) → Emmagatzematge a llarg termini en nitrogen líquid.

També es pot emmagatzemar directament en un congelador a -80 ° C durant la nit i després transferir -se al nitrogen líquid per a l'emmagatzematge.

Yongyue Medical és una empresa d’alta tecnologia especialitzada en R + D, producció i vendes de consumibles biomèdics. Consells de pipeta, canonades, placa PCR, productes de cultiu cel·lular i altres consumibles de laboratori biològic. Yongyue Medical és digne de la vostra confiança i tria. Benvingut a consultar!